پزشکان گیاهان

استخراج DNA به روش جوشاندن و SDS

1-      سانتریفیوژ 4 میلی لیتر از کشت 24 ساعته باکتری در LB

2-      حذف فاز رویی و اضافه کردن 500 میکرولیتر بافر استخراج به پلیت حاصل و مخلوط کردن آهسته انها

3-      جوشاندن محلول حاصل در آب جوش 100 درجه به مدت 8 دقیقه

4-      اضافه کردن 250 میکرولیتر فنل، 250 میکرولیتر کلروفرم-ایزوآمیل الکل (به نسبت24:1) به محلول مرحله قبل

5-      سانتریفیوژنمونه ها (rpm13000 به مدت min5)

6-      جمع اوری فاز رویی با تیپ نوک بریده و ریختن در تیوب جدید

7-      اضافه کردن 250 میکرولیتر کلروفرم-ایزوآمیل الکل (به نسبت24:1) به محلول مرحله قبل و آهسته چند بار پیپت کردن آن و سانتریفیوژ(rpm13000 به مدت min5) و سپس منتقل کردن فاز رویی به تیوب جدید

8-      اضافه کردن ایزوپروپانول سرد هم حجم فاز رویی به تیوب و سانتریفیوژ نمونه ها (rpm13000 به مدت min8)

9-      حذف فاز رویی و اضافه کردن 500 میکرولیتر اتانول سرد 70% به پلیت و چند بار پیپت کردن و سانتریفیوژ (rpm13000 به مدت min8 در 4 درجه سانتی گراد)

10-  دور ریختن الکل و قرار دادن تیوبهای در باز در دمای اتاق برای خشک شدن پلیت و حذف الکل (5-10 دقیقه)

11-  اضافه کردن 30 میکرولیتر آب دوبار تقطیر استریل یا TE بافر به پلیت و نگهداری در فریزر 20- درجه

 بافر استخراج:

Tris-Hcl   PH 7.6    0.2 M

EDTA                        0.2 M

SDS                           2%